[目的]
    規范Waters液相色譜系統的使用和維護。

[范圍]
    本規程適用于Waters液相色譜系統的使用和維護。
[職責]
    質(zhì)檢室儀器分析員負責Waters液相色譜系統的日常使用和維護。
[系統組成]
    本系統由Waters 600E多溶劑輸送系統（有梯度控制器的高壓輸液泵）、Waters在線(xiàn)脫氣機、Rheodyne 7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥、Waters 2487雙通道紫外檢測器、Millennium32色譜工作站/電腦等組成，另外還包括打印機、斷電保護器和通風(fēng)柜等輔助設備。

[開(kāi)機程序]

1. 狀態(tài)檢查：

1）檢查儀器外觀(guān)是否完好

2）檢查各種線(xiàn)纜連接是否穩固，外表有無(wú)損傷痕跡

3）確認環(huán)境溫度在15至35℃之間

4）相對濕度在20%至80%之間

3. 接線(xiàn)要求：

1）液相色譜主機電源

2）連接電腦主機和顯示器電源

4. 開(kāi)機步驟：

1）打開(kāi)電腦電源，進(jìn)入windows系統

2）打開(kāi)液相色譜電源，儀器開(kāi)始自檢（約5～6min），待儀器操作面板上出現“Idle”字樣表示自檢成功，儀器進(jìn)入待命狀態(tài)。

[測試步驟]

1. 進(jìn)入軟件

1）雙擊電腦桌面上的Empower快捷圖標，出現Empower登陸窗口。輸入用戶(hù)名與密碼，默認賬號為“system”，密碼為“manager”，點(diǎn)擊“OK”進(jìn)入Empower工作站。

2）選擇“運行樣品”界面，點(diǎn)擊“確定”,然后選擇待選定的操作項目以及色譜系統

2 編輯儀器方法和方法組

1）在“運行樣品”界面中，監視區單擊方法組編輯向導。

2）選擇新建按鈕，彈出儀器方法編輯器。

3）通用編輯頁(yè)面中，可設置單次輸送體積，查看脫氣選項，確認設置正確，選擇等度或者梯度，總流量以及流動(dòng)相配比等選項。

4）單擊2475圖標，彈出2475編輯界面，在波長(cháng)模式中選擇相應的波長(cháng)模式，單波長(cháng)或者雙波長(cháng)，輸入所需的波長(cháng)，選擇相應的采樣速率，一般為2點(diǎn)/秒。

5）點(diǎn)擊“文件”，選擇“另存為”，輸入儀器方法名稱(chēng)，點(diǎn)擊“保存”，退出。

6）在被選項中選擇所需的儀器方法名稱(chēng)，點(diǎn)擊“下一步”。

7）在下拉菜單中選擇所需的處理方法和報告方法（如果沒(méi)有合適的方法選擇"無(wú)處理"、"無(wú)報告"），點(diǎn)擊“下一步”。

8）輸入方法組名稱(chēng)，單擊"完成"。

3 運行方法進(jìn)樣

1）在“運行樣品”界面中，選擇相應的儀器方法，點(diǎn)擊“監視器”，在監視窗口監視基線(xiàn)至系統平衡，停止系統監視狀態(tài)，點(diǎn)擊停止按鈕。單進(jìn)樣，點(diǎn)擊參數編輯快捷方式進(jìn)入定義單進(jìn)樣參數編輯界面，輸入樣品名、功能、方法組等參數。點(diǎn)擊“進(jìn)樣”。

2）建立樣品組和樣品組方法

選擇“樣品組”任務(wù)欄，進(jìn)入樣品列表，依次設置以下內容：樣品瓶號、樣品名稱(chēng)、樣品類(lèi)型、進(jìn)樣次數、進(jìn)樣體積、運行時(shí)間、方法組、、下一進(jìn)樣延遲時(shí)間等，點(diǎn)擊“運行”，方法組開(kāi)始進(jìn)樣。

[更換溶劑]
1.打開(kāi)600E泵后，轉動(dòng)進(jìn)口集合管閥手柄（以下簡(jiǎn)稱(chēng)手柄）至RUN位置；
2 .將一塑料燒杯放在參照閥出口管下以收集分流的溶劑，向右打開(kāi)參照閥（斷開(kāi)柱和進(jìn)樣器）；
3. 按［Direct］鍵使其顯示直接控制屏幕，設流速為1ml/min（梯度配比閥在0ml/min時(shí)不工作）；
4. 選擇欲使用的某一溶劑通道，設其比例為*，其它為0%；
5. 將輸液管從原有溶劑瓶中取出，放入一干凈的空瓶中；
6. 逆時(shí)鐘轉動(dòng)手柄至DRAW位置，用啟動(dòng)注射器從進(jìn)口集合管閥的接口抽出約2ml溶劑；
7. 再將輸液管放入新溶劑瓶?jì)?，繼續抽吸直到新溶劑出來(lái)并無(wú)氣泡為止；
8. 轉動(dòng)手柄至RUN位置，將啟動(dòng)注射器取下并排掉筒內的溶劑。
9. 重復5.2.2.4.~5.2.2.8.直至所有即將使用的溶劑更換完畢。

[排氣泡]
1. 打開(kāi)參照閥，換流動(dòng)相為超純水，設流速為10ml/min（注意：確認參照閥是打開(kāi)的，否則可能損壞安裝好的柱）；

2. 轉動(dòng)進(jìn)口集合管閥手柄至DRAW位置，用啟動(dòng)注射器抽出約10ml水；
3. 順時(shí)鐘轉動(dòng)手柄至INJ位置，緩慢用力使水通過(guò)泵頭從參照閥出口管排出（注意不要將氣泡注入泵中）；
4. 按［Stop flow］屏幕鍵停泵，關(guān)上參照閥。
5. 如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下泵出口管，用塑料管連接至塑料燒杯中，設流速為10ml/min，沖洗2~5min（或更長(cháng)時(shí)間）后停泵，重新接上柱。

[平衡系統（分兩種情況進(jìn)行）]
1. 等度模式
1.1. 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min，以超純水沖洗系統10min。
1.2. 檢查管路連接、柱接口及泵頭處是否漏液，如漏液應予以排除。
1.3. 觀(guān)察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動(dòng)應在平均值的5~10%以?xún)?。如超出此范圍，可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，重?.2.3.下的步驟。
1.4. 壓力波動(dòng)平穩后，換檢驗方法規定的流動(dòng)相比例沖洗系統。在檢查基線(xiàn)穩定性前，讓zui少5~6倍柱體積的流動(dòng)相通過(guò)系統。
1.5. 在QuickSet窗口下的Instrument Method檔內選擇所需的儀器方法，按「Monitor」（此后泵由軟件控制），觀(guān)察基線(xiàn)和壓力變化。如果沖洗至基線(xiàn)漂 移<10-3Au/min，噪聲為10-4Au數量級，且壓力平穩時(shí)，可認為系統已達到平衡狀態(tài)，可以進(jìn)樣。5.3.1.6. 按「Abort」圖標（左上第五個(gè)），停止監視基線(xiàn)。
2. 梯度模式
2.1. 按檢驗方法規定的條件沖洗平衡系統，并注意壓力波動(dòng)變化和排氣泡。
2.2. 在進(jìn)樣前運行1~2次空白梯度。

[進(jìn)樣]
1. 在QuickSet窗口內左下部選標簽，在Sample Name檔內填寫(xiě)試樣名稱(chēng)；在Function檔內選擇試樣類(lèi)型（標準選“Inject Standards”；樣品選“Inject Samples”）；在Method Set檔內選擇所需的方法組；在Injection Volume檔內輸入進(jìn)樣體積；在Run Time檔內輸入記錄時(shí)間。
2. 用針頭濾器過(guò)濾試樣溶液（注射液可不需要過(guò)濾），用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。如按部分裝液法，用微量注射器定容進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應不大于定量環(huán)體積的50%，并要求每次進(jìn)樣體積準確、相同；5.4.2.2. 如按*裝液法，用定量環(huán)定容進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應不小于定量環(huán)體積的3倍（5~10倍準確性更佳）。
3. 按標簽內右邊的進(jìn)樣(Inject)按鈕，等待窗口底部狀態(tài)檔內顯示“Waiting”后，方可進(jìn)樣。
4. 將進(jìn)樣閥手柄轉動(dòng)至Load位置，將注射器針*插入進(jìn)樣閥入口中，平穩地注入試樣溶液，除另有規定外，讓注射器留在進(jìn)樣閥上，將進(jìn)樣閥手柄快速轉動(dòng)至Inject位置，系統將自動(dòng)運行，采集數據并記錄圖譜。
5. 讓進(jìn)樣閥手柄保持在Inject位置，到下次進(jìn)樣前1~2min切換回Load位置，將注射器從進(jìn)樣閥中拔出。
6. 先用水再用試樣溶液清洗注射器后，按以上程序繼續進(jìn)樣，直至完成。

[數據處理（外標法）和打印]
1. 右擊系統主界面下的『Browse Project』圖標，選擇相應的項目，按「OK」進(jìn)入Project窗口，選標簽。

2. 建立處理方法　選擇一個(gè)待積分的標準，右擊后選“Review”進(jìn)入Review窗口。按「Processing Method Wizard」圖標（左邊*個(gè)）進(jìn)入New Processing Method向導窗口，按「OK」。
2.1. 劃入一個(gè)感興趣的zui窄的峰，按「Next>」；
2.2. 劃入一段包含噪聲的基線(xiàn)，按「Next>」；
2.3. 劃入一段要積分的區間，按「Next>」；
2.4. 根據情況選擇zui小峰面積和zui小峰高，按「Next>」、「Next>」；
2.5. 在Name檔內輸入各組分峰的名稱(chēng)，按「Next>」、「Next>」；
2.6. 在Method Name檔內填寫(xiě)方法名稱(chēng)，按「Finish」。退出Review窗口。
3. 修改標準　選中所有標準，右擊后選“Alter Sample”進(jìn)入Alter Sample窗口。
3.1. 在Sample Type檔內將Unknown改成Standard；
3.2. 按「Amount」圖標（左上第六個(gè)）進(jìn)入Component Editor窗口；
3.3. 按「Copy from Process Method」圖標（左上第五個(gè)），選擇剛建立的處理方法，按「Open」，在Value和Units檔內分別輸入標準所含各組分的數值和單位，完成后按「OK」回到Alter Sample窗口；
3.4. 按「Save」圖標存盤(pán)，退出Alter Sample窗口。
4. 積分　先選中所有標準，再選中所有未知樣品，右擊后選“Process”進(jìn)入Background Processing & Reporting窗口，選Use specified processing methods，在右邊檔內選擇剛建立的處理方法，按「OK」。
5. 打印　在Project窗口下選標簽。
5.1. 選中要打印的標準/樣品，右擊后選“Preview”進(jìn)入Open Report Method窗口，選合適的打印方法，按「OK」進(jìn)入Report Publisher (Preview)窗口，預覽打印的結果。按打印(Print)圖標（左上第二個(gè)）即可打印結果。
5.2. 按「Close」可進(jìn)入Report Publisher窗口對報告方法進(jìn)行修改，完成后按「Print」圖標（右數第二個(gè)）即可打印結果。
6. 數據處理完成后，關(guān)閉所有窗口，在主界面下按「Logout」退出系統，關(guān)閉Millennium32軟件，再依次關(guān)閉電腦主機、顯示器、打印機。
7. 清洗系統和關(guān)機
7.1. 數據采集完畢后，關(guān)閉檢測器，繼續以工作流動(dòng)相沖洗10min后，換水沖洗。

[關(guān)機程序]

1）關(guān)機前應用適當比例的有機相和水相沖洗柱子

2）關(guān)閉儀器電源

3）關(guān)閉電腦電源

[維護保養程序]

1）定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內衛生條件，防塵。

2）使用完畢后用防塵布遮蓋儀器如連續3個(gè)月未使用儀器，將儀器通電1個(gè)小時(shí)后再關(guān)閉，除掉儀器內部濕氣。

［注意事項］

1.使用儀器前必須仔細閱讀儀器使用說(shuō)明書(shū)。

2.按儀器使用要求準備測試樣品，不得測試不符合要求的樣品。

3.小心操作，防止樣品污染和腐蝕儀器。

4.有機溶劑有害健康，各溶劑瓶口應封嚴。

5.儀器使用后按操作程序，切斷電源，清理擦拭儀器，蓋上儀器罩。

6.在操作時(shí)發(fā)生故障應停止使用，并及時(shí)通知管理人員。