1 色譜柱的維護。我們在使用新的色譜柱應該在我們自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測試,即使用色譜柱附帶的檢驗報告上測試條件和樣品來(lái)測定該色譜柱的柱效。并且,在以后的使用中,應時(shí)常對色譜柱進(jìn)行測試。
而且在使用的過(guò)程中常常有堵塞的現象,造成這種現象的主要原因是:
①溶劑中的不溶物
②樣品中的不溶物
③泵進(jìn)樣器等中的不溶物
④柱內不溶物的形成等。
如果當色譜柱堵塞以后我們可以對色譜柱進(jìn)行修復,
先,使用含鹽緩沖液后(如離子對試劑)應用溶解性強的溶劑(如水)進(jìn)行沖洗。
其次,先斷開(kāi)檢測器,然后用對來(lái)自樣品中的物質(zhì)有強溶解性的溶劑進(jìn)行沖洗,對于反相色譜柱,可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯方、庚烷等,在此條件下,應避免溶劑的pH低于2或高于8。
zui后如果經(jīng)過(guò)上述還是沒(méi)有修復,色譜柱壓力還是沒(méi)有下降,則要斷開(kāi)檢測器,將色譜柱反方向放置,然后檢查柱壓,若壓力穩定下降,則保持色譜柱反方向連接,用低于0.5 ml/min 流速沖洗一小時(shí)。如果壓力不下降,則要看內置過(guò)濾器是否被堵塞,如果被堵塞應沖洗或更換,若進(jìn)口端的填料發(fā)生堵塞,柱子將不可能被*恢復,只能通過(guò)去掉進(jìn)口端的部分填料,重新填充進(jìn)行有限的柱效恢復。而且修復的厚度是2-5mm。
2 色譜柱的保養。色譜柱在使用前,進(jìn)行柱的性能測試,并將結果保存起來(lái),作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠(chǎng)報告中的條件進(jìn)行(出廠(chǎng)測試所使用的條件是*條件),只有這樣,測得的結果才有可比性。我們在對色譜柱使用前進(jìn)行測試以后,我們要根據不同的情況對色譜柱進(jìn)行保養:①反相色譜柱每天實(shí)驗后的保養:使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相,實(shí)驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。②長(cháng)期保存色譜柱:如色譜柱要長(cháng)時(shí)間保存,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以?xún)Υ嬗诩兗状蓟蛞译嬷?,正相柱可以?xún)Υ嬗趪栏衩撍蟮募冋和橹?,離子交換柱可以?xún)Υ嬗谒ê栏瘎?、氮化鈉或柳硫汞)中,并將購買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲存的溫度是室溫。
概括起來(lái)就是:①柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強烈震動(dòng);②當柱子和色譜儀聯(lián)結時(shí),閥件或管路一定要清洗干凈;③要注意流動(dòng)相的脫氣;④避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相;⑤進(jìn)樣樣品要提純;⑥嚴格控制進(jìn)樣量;⑦每天分析工作結束后,要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品;⑧每天分析測定結束后,都要用適當的溶劑來(lái)清洗柱;⑨若分析柱長(cháng)期不使用,應用適當有機溶劑保存并封閉。