分光光度分析中經(jīng)常出現波動(dòng)的問(wèn)題,吸光度無(wú)法穩定在一個(gè)恒定的數值上。這種情況常見(jiàn)于老式的721,722,7230等機型上,近幾年出的島津2550 系列,瓦里安的Carry系列,普析的1901系列等的新式儀器,儀器的波動(dòng)一般比較小。如果出現這種情況,一般采用下面方式處理:
1. 先確定待測溶液的穩定性
之前就有版友出現過(guò)這種情況,說(shuō)吸光度波動(dòng)很大,隨時(shí)間的增加,吸光值減小/增大等的問(wèn)題,先別懷疑儀器,假設儀器是穩定的,驗證待測溶液是否穩定。如 果溶液不穩定,那就需要靜置一段時(shí)間,等穩定了再測。這里我可以建議一點(diǎn),就是做個(gè)簡(jiǎn)單的試驗設計,以時(shí)間為橫坐標,以吸光度為縱坐標,看看吸光度隨時(shí)間 的變化曲線(xiàn)如何,等到穩定以后,下次記住這個(gè)時(shí)間,以后就直接靜置這么長(cháng)時(shí)間,直接測定了。
簡(jiǎn)單做了一個(gè)圖,看看吸光度隨時(shí)間的變化曲線(xiàn),由圖1可以看出,在0-11分鐘,顯色劑和組分還在反應,如果在這個(gè)時(shí)間段檢測,吸光度肯定不穩定;在 11-13分鐘時(shí),吸光值基本穩定,可以上機檢測;在13分鐘以后,開(kāi)始有點(diǎn)褪色了。所以,下次直接靜置11-分鐘后開(kāi)始上機測定就可以了。
還有一點(diǎn)很重要,就是這種不穩定的情況能不能重復,即有沒(méi)有重現性,如果沒(méi)有重現性,那只能說(shuō)明是偶然誤差,可能由于電壓不穩啊,震動(dòng)等原因造成的??芍匦聹y定一次或多次取平均值即可。
2. 檢查是否操作不當
經(jīng)常做試驗的時(shí)候,有時(shí)候發(fā)現自己的數據不平行,俺就會(huì )反過(guò)來(lái)重頭檢查一下。先檢測比色皿在上機的時(shí)候是否擦拭干凈。這個(gè)很重要,有時(shí)擦拭不干凈,會(huì ) 造成0.010左右的吸光值的偏差,即使是同一溶液上兩次儀器,也會(huì )出現這種誤差,主要是由于比色皿沒(méi)有擦拭干凈的原因。至于比色皿需要配對使用(對于老 儀器),或采用扣除池空白的方式(對于有此功能的新儀器),俺就不在此啰嗦了。
對于拉桿式的儀器,要將拉桿復位。俺就鬧過(guò)一個(gè)笑話(huà),印象很深刻的。一個(gè)顏色特別深的時(shí)候,上機發(fā)現吸光值為零。俺還檢查了很多方面,看前處理是否出了問(wèn) 題,看波長(cháng)是否在zui大吸收處,是不是儀器不穩定,檢查了一大圈,都沒(méi)有問(wèn)題啊,而且目視顏色很深啊。查來(lái)查去發(fā)現,儀器光路對準第二個(gè)比色皿位置,而俺的 樣品溶液在*個(gè)比色皿位置上。哎,大家別笑話(huà),真人真事,讓大家見(jiàn)笑了。這里就要建議大家養成良好的習慣,使用完畢后一定要將拉桿復位,如果儀器不是一 個(gè)人使用,別人可能習慣不好,自己在試驗的過(guò)程中一定要親自檢查一下。
3 . 電壓不穩或光源不穩
上面兩個(gè)方面都沒(méi) 有涉及儀器本身的問(wèn)題,下面說(shuō)說(shuō)儀器方面。若果1.1.1和1.1.2您都做的很好,那有可能出現以下問(wèn)題。如果您所在實(shí)驗室電壓不穩,也有可能造成儀器 不穩定。據俺了解,儀器里面好像內置了穩壓系統。如果檢查出來(lái)是由于電壓不穩定造成的,建議安裝穩壓電源等裝置。這種情況好像比較少見(jiàn)啊。
光源問(wèn)題是大家容易忽略的問(wèn)題,先看看氘燈和鎢燈的能量圖,如下:
圖2 氘燈和鎢燈的能量圖
建議大家新儀器備份一個(gè)能量圖,如果發(fā)現儀器不穩定的話(huà),可以做一個(gè)能量圖,和原來(lái)的能量圖比較,看看能量是否下降的很厲害,如果下降的很厲害,可能是光 源出問(wèn)題了,建議更換光源燈。尤其是氘燈,壽命一般比鎢燈短,所以使用時(shí)更要注意,如只使用可見(jiàn)光區,等儀器自檢完畢后,可利用軟件關(guān)閉氘燈,這樣可以節 省氘燈。如果在紫外區,且長(cháng)時(shí)間不用的話(huà),也可以暫時(shí)關(guān)閉氘燈。對于721等老儀器,沒(méi)有氘燈使用計時(shí)等功能和能量掃描功能的儀器,可以自己設計一個(gè)氘燈 使用記錄,每次記錄氘燈使用的時(shí)間,等過(guò)了半衰期及時(shí)更換。
在更換光源的時(shí)候,先建議讓儀器廠(chǎng)家的人來(lái)更管。如果條件不許的話(huà),自己更換,一定要帶手套,裝上以后要對燈的位置進(jìn)行調節。
4. 檢測器問(wèn)題
還有可能是檢測器的問(wèn)題,老儀器一般都用光電管作為檢測器,新儀器一般都使用光電倍增管。無(wú)論那種,對檢測器的保護,對儀器的保養一定要做好。之前由一個(gè) 版友儀器壞了,就是由于長(cháng)時(shí)間不用,里面電子元件受潮老化導致。所以,要定期的對儀器進(jìn)行維護,及時(shí)更換干燥劑,保持儀器干燥。長(cháng)時(shí)間不用,可定期開(kāi)機, 這樣里面的電子元件本身會(huì )發(fā)熱,驅除潮氣。如果檢測器壞了,就要請廠(chǎng)家的專(zhuān)業(yè)人員來(lái)更換了。